快速連接™ 試劑盒

快速末端平齊化™ 和快速連接試劑盒
#E0542S        20 次反應(yīng)            ?1,769
#E0542L        100 次反應(yīng)          ?7,059

■  5 分鐘快速連接粘性末端或平末端
■  室溫下即可進(jìn)行連接反應(yīng)
■  T/A 克隆
■  dsDNA 切刻修復(fù)

本試劑盒在室溫（25℃）反應(yīng) 5 分鐘，即可完成 DNA 粘性末端或平齊末端的連接反應(yīng)。

– 快速 T4 DNA 連接酶（重組酶）
– 2X 快速連接反應(yīng)緩沖液

132 mM Tris-HCl，20 mM MgCl₂，2 mM DTT，2 mM ATP，15% 聚乙二醇（PEG 6000），pH 7.6 @ 
25℃。

該試劑盒經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制檢測(cè)，以確保酶的高純度和高效率。

用快速連接試劑盒能使大多數(shù)連接反應(yīng)在 25℃ 條件下 5 分鐘甚至更短時(shí)間內(nèi)達(dá)到反應(yīng)終點(diǎn)，增加反應(yīng)時(shí)間反應(yīng)效率不會(huì)增強(qiáng)。事實(shí)上，連接 1 小時(shí)后轉(zhuǎn)化效率便會(huì)降低，如果 25℃ 反應(yīng)過(guò)通宵，則轉(zhuǎn)化效率會(huì)下降到 75%。

電轉(zhuǎn)化可以使轉(zhuǎn)化效率提高幾個(gè)數(shù)量級(jí)。在用快速連接反應(yīng)產(chǎn)物做電轉(zhuǎn)化前，一定要降低 PEG 濃度。推薦使用柱離心式 DNA 純化方法，或選擇電轉(zhuǎn)連接酶（NEB #M0369）。

快速連接進(jìn)程曲線：LITMUS 28i 載體經(jīng) EcoRV 切割（平齊末端）或 HindⅢ切割（粘性末端）后，用小牛腸堿性磷酸酶（CIP）處理，膠回收純化。插入片段來(lái)自 φX174 DNA 的 HaeⅢ 消化產(chǎn)物（平齊末端）或 λDNA 的 HindⅢ 消化產(chǎn)物（粘性末端），插入片段和載體以 3:1 的比例，使用快速連接試劑盒進(jìn)行連接。連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入化學(xué)方法制備的大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，在 LB-amp 平板上 37℃ 過(guò)通宵培養(yǎng)。